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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
ADP; 5'-二酸腺苷/腺苷-5'-二酸C20H19NO5甲基-2-戊基-1,二氧戊環(huán)

沙格列汀/沙克列汀C9H8O檸檬酸鐵水合物

更昔洛韋C54H88O232-羥基-甲基-5-溴吡啶

更昔洛韋(標準品)C19H12O7肼基吡啶

5,6-二甲基-1-茚酮C16H19NO4全氟辛基磺酸四基銨

芍藥苷（標準品）C9H6O4

芍藥苷(40%)C22H20N2O5四(二甲氨基)鈦(IV)

芍藥苷(50%)C22H20N2O45--2,二氟吡啶

芍藥苷(90%)C17H16O5聚[二酰氧基基]

芍藥苷(98%)C36H62O8異尿酸三縮水甘油酯

5-羥基色氨酸,5-HTPC13H12N2O.HCl溴嘧啶鹽

5-羥基色氨酸(標準品)C26H40O8右旋樟腦-10-磺酰

組C8H8O3-T 三水合物

組(標準品）C32H44N2O8溴-

卡巴拉汀C32H44N2O8.HBr2-甲基咪唑啉鹽酸鹽

卡巴拉汀(標準品)C10H12O46-甲氧基煙酸甲酯

咖啡酸C44H62O142',6'-二酮

咖啡酸(標準品)C42H64O14溴-2,6-二氟甲酸

低氧誘導因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒CD56/NCAM1  神經細胞粘附分子11 Kit

低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)ELISA試劑盒CD171/NCAM-L1  神經細胞粘附分子配體1100 ul

低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒CD172a/SIRP Alpha  信號調節(jié)蛋白α100 ul

的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒CD57  CD57100 ul

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒CD68  CD68100 ul

蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒CD68  CD6820 ul

膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒CD69/CLEC2C/AIM  活化誘導分子CD69100 ul

膽酰轉移酶(ChAT)ELISA試劑盒CD72/Ly-32  CD72蛋白20 ul

膽固酯轉移蛋白(CETP)ELISA試劑盒CD74/MHC II  CD74100 ul
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