?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
鹽酸法舒地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)HES1 (D6P2U) Rabbit mAb5-氨基嘧啶

酚-O-β-D-槐糖苷；酚-O-槐糖苷Phospho-p90RSK (Ser380) (D3H11) Rabbit mAb氨基-2-羥基吡啶

草質(zhì)素苷(標(biāo)準(zhǔn)品)nsin 2 Antibody噻吩-2-羧酸

紅景天素；草質(zhì)素甙；Calumenin (4C6) Mouse mAb1-BOC-吡咯烷-甲酸

地達(dá)諾辛；去羥肌苷Phospho-MARCKS (Ser159/163) (D13D2) Rabbit mAb吡咯烷-甲酸

羊藿次苷IPhospho-KIF1B (Ser1487) Antibody2-甲基-甲酸甲酯

寶藿苷II；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-DDR1 (Tyr792) AntibodyBOC-DL-脯氨酸

槐屬苷(標(biāo)準(zhǔn)品)SDHA (D6J9M) XP® Rabbit mAb基磺酰

槐屬苷SDHA (D6J9M) XP® Rabbit mAb2-氨基-3,5-二溴-6-甲基吡啶

甲基麥冬二氫高異黃酮A,甲基麥冬黃烷酮APathScan® Total Smad2/3 Sandwich ELISA KitN-基-N-羥基間甲

甲基麥冬黃烷酮BPathScan® Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit6-甲基

7,2'-二羥基-3′,4′-二甲氧基異黃烷PathScan® Total Smad3 Sandwich ELISA Kit丁二酸二異酯

6aR,11aR）羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷PathScan® Phospho-Smad3 (Ser423/425) Sandwich ELISA KitN-基嗎啉

千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖酸苷PhosphoPlus® IGF-I Receptor β Antibody DuetN-基哌

泮托拉唑鈉1.5水合物Phospho-REPS1 (Ser709) (D8C1) Rabbit mAb7-氨基庚酸

泮托拉唑鈉1.5水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)基甲酸

(S)-10-羥基喜樹;10-羥基喜樹FoxK2 Antibody硝基-羥氨基酚

10-羥基喜樹(標(biāo)準(zhǔn)品)SSRP1 Antibody一環(huán)戊烷

Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試劑盒phospho-CYLD(Ser418)  酸化微管結(jié)合蛋白CYLD100 ul

Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒CYP1A1  細(xì)胞色素P450 1A1100 ul

Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)ELISA試劑盒P450 1A2/CYP1A2  細(xì)胞色素P450 1A220 ul

Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒CYP11A1/P450SCC  細(xì)胞色素P450 11A1100 ul

3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA試劑盒CYP2C9   細(xì)胞色素P450 2C9100 ul

3-α羥基類固脫氫酶(Akr1c9)ELISA試劑盒CYP3A4  細(xì)胞色素P450 3A4100 ul

3-O-甲基多巴(3-OMD)ELISA試劑盒CYP2D6  細(xì)胞色素P450 2D61 Kit

Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA試劑盒CYP19  細(xì)胞色素P450 19100 ul

Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA試劑盒CYP8A1/PTGIS  前列環(huán)素合成酶100 ul
輪狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格EB病毒核抗原-3B抗體(R)-4-Benzyl-2-oxazolidine中文名：(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮?jiǎng)e名：分子式：C10H112

內(nèi)皮素B受體抗體Benzyl cinnamate中文名：肉桂酸苯甲酯別名：分子式：C16H14O2

附睪蛋白酶抑制蛋白N-Benzylphthalimide中文名：N-苯甲基鄰苯二甲酰亞胺別名：分子式：C15H112

外生性骨疣樣蛋白2抗體2-Benzoylbenzoic acid中文名：2-苯甲酰苯甲酸別名：BB 酸分子式：C14H10O3

烯脂酰輔酶A解酶抗體2-Benzyl-2-(dimethylami)-4'-morpholibutyrophene中文名：2-芐基-2-(二甲基氨基)-4'-嗎啉基苯基丁酮?jiǎng)e名：分子式：C23H30N2O2