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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
環(huán)己烷(色譜級(jí))OLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAb2-基-3,5-二氟吡啶

二硫化碳(色譜級(jí))Phospho-CDK Substra [pTPXK] (D9V5N) Rabbit mAb4,6-二甲氧基-2-(氧基羰基)氨基嘧啶

四化碳(色譜級(jí))KPNA2 Antibody9,9-二[(羥氧基)基]芴

二甲基亞砜(色譜級(jí))Gα(q) (D5V1B) Rabbit mAb3,二氫異喹啉-1(2H)-酮

N,N-二甲基酰(色譜級(jí))Phospho-MAPK Substras Motif [PXpTP] MultiMab™ Rabbit mAb mix2-溴-1-(2,6-二)酮

鄰二 ;1，2-二(色譜級(jí))Torin 1(甲基)甲酸

二(色譜級(jí))Pan Na Channel α Subunit (D2I9C) Rabbit mAb氧酸鈉

二二二(色譜級(jí))M-RIP (D9I5T) Rabbit mAb二二二甲基酸酯

二丁(色譜級(jí))Torin 2基-1,磺酸內(nèi)酯

(色譜級(jí))FTO Antibody2--甲基-硝基吡啶

甲酸(色譜級(jí))Phospho-Ser-Pro-Pro Motif [pSPP] Rabbit mAb2-氟-5-(三氟甲基)甲酰

正己烷(色譜級(jí))SignalSilence® OSR1 siRNA I1,1-二溴-3,3,三氟酮

正庚烷(色譜級(jí))PSMC2 (D5T1T) Rabbit mAb3,5-二甲酸甲酯

異辛烷(色譜級(jí))M-RIP (D8G8R) Rabbit mAb5,6-二甲氧基-2-(吡啶基)亞甲基-1-茚酮

異(色譜級(jí))Eg5 (E1L3W) Rabbit mAb3,5-吡啶二甲酸二酯

異(色譜級(jí))NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1-甲基-1H-咪唑-2-甲

二甲(色譜級(jí))Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control (Pacific Blue™ Conjuga)肉桂基

異丁(色譜級(jí))Ras (G12V Mutant Specific) (D2H12) Rabbit mAbN-基異基

凋亡抑制因子3(BIRC4/API3)ELISA試劑盒T7 tag  T7 tag標(biāo)簽100 ul

凋亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)ELISA試劑盒V5 tag  V5 tag標(biāo)簽100 ul

凋亡相關(guān)半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA試劑盒KT3 tag  KT3 tag100 ul

凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA試劑盒VSV-G tag  VSV-G tag標(biāo)簽100 ul

淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結(jié)合家族B成員1(FE65)ELISA試劑盒HIV gp120  艾滋病病毒100 ul

電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)ELISA試劑盒HIV gp41  艾滋病病毒100 ul

電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA試劑盒HIV-1 ENV(gp160)  艾滋病病毒-1包膜糖蛋白20 ul

電壓門控通道(VGKC-ab)ELISA試劑盒HIV-1 ENV (gp160)  艾滋病病毒-1包膜糖蛋白100 ul

電壓門控通道(VGKC)ELISA試劑盒HLA-DR  HLA-DR100 ul
犬細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格DHX螺旋酶抗體Lycoclaval中文名：別名：14-Serratene-3,21,24-triol分子式：C30H50O3

肌營養(yǎng)蛋白α抗體Niloticin中文名：尼洛替星別名：24,25-Epoxy-23-hydroxytirucall-7-en-3-one分子式：C30H48O3

視神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)蛋白/早老素結(jié)合蛋白抗體Simiarel中文名：西米杜鵑醇別名：5-Adianen-3-ol分子式：C30H50O

胞質(zhì)分裂專一蛋白7抗體Ursolic acid中文名：熊果酸別名：3-Hydroxy-12-ursen-28-oic acid；烏蘇酸分子式：C30H48O3

環(huán)指蛋白19抗體3β-Acetoxyurs-11-en-28,13β-olide中文名：別名：分子式：C32H48O4