?
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
酚紅使用說明書Anti-LANPL研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學

兔白介素12（IL-12/P70）elisa試劑盒Anti-LRCH2研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 激酶和磷酸酶

Jurkat, Clone E6-1 （人急性T淋巴細胞白血病細胞）說明書Anti-LRDD/PIDD研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 生長因子和激素 內(nèi)分泌病

小鼠腸巨噬細胞*培養(yǎng)基說明書Anti-LRFN1研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 染色質(zhì)和核信號 神經(jīng)生物學

人催乳素誘導蛋白（PIP）elisa試劑盒Anti-LPPR1/PRG3研究領(lǐng)域  腫瘤 神經(jīng)生物學 細胞粘附分子 細胞類型標志物

蓋玻片使用說明書Anti-Laminin 2 alpha研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 腫瘤細胞生物標志物

小鼠下丘腦神經(jīng)元細胞現(xiàn)貨供應Anti-LIPG/Endothelial lipase研究領(lǐng)域  免疫學 細菌及病毒

Taq 酶抗體250U多少錢Anti-Luciferase研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學

豬巨細胞集落刺激因子GM-CSFElisa KitAnti-LAP3研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 細胞周期蛋白

硬脂基*基氯化銨實驗步驟Anti-LFABP/FABP-1研究領(lǐng)域  免疫學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

DEAE纖維素DE-52保存Anti-LRRK2研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 干細胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 細胞表面分子 細胞類型標志物

透明質(zhì)酸保存Anti-LRP6研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 結(jié)合蛋白 線粒體

核黃素轉(zhuǎn)運因子2（RFT2）elisa試劑盒Anti-LIX1研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 藥物及化合物

雙?？虏《?/font>PCR檢測試劑盒說明書Anti-LFABP/FABP-2研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 染色質(zhì)和核信號 生長因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

小鼠百白破抗體elisa試劑盒Anti-LIS1研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 細胞周期蛋白

次野鳶尾黃素LIFR/CD118 peptide  白血病抑制因子受體抗原TPA/PLAT  組織型纖溶酶原激活劑抗體

胡麻屬苷Lingo-1  go受體作用蛋白抗原TP53TG5  p53靶蛋白5抗體

異佛司可林LIS1(Lissencephaly-1 protein)  無腦回的致病基因LIS1抗原TP53TG3  p53靶蛋白3抗體

表木栓LFABP/FABP-1(Liver Fatty acid binding protein)  肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原TP53I8/EI24  腫瘤蛋白p53誘導蛋白8

鴨腳樹葉堿LFABP/FABP-2(Liver Fatty acid binding protein)  肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原TP53I13  腫瘤蛋白p53誘導蛋白13(腫瘤抑制基因)

山柰酚-3-O-蕓香糖苷LN (laminin)  層粘連蛋白(多肽抗原)TP53I11  腫瘤蛋白P53誘導蛋白11抗體

4'-去甲氧基表鬼臼毒素Laminin Beta1 peptide  層粘連蛋白β1抗原TP/thymidine phosphorylase  胸苷磷酸化酶抗體

三白草酮lamin A  核纖層蛋白A抗原Torc2/Crtc2  CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體

洛伐他汀LOX-1/OLR1  凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體TORC1/CRTC1  環(huán)腺苷酸應答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體

松蘿酸LPLUNC1  人鼻咽癌癌基因多肽抗原TOPO II/TOPO II Alpha  DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體
豬鼻支原體PCR檢測試劑盒價格人α乳清蛋白(α-La)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人α突觸核蛋白(α-SYN)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100支/盒

人α烯醇化酶(αEL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT96支/盒

人β2糖蛋白(β2-GP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1AbIgA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1毫升

人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1AbIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1AbIgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5毫升